Cryo microscopie électronique pour la matière molle et l’interface physique-biologie
La cryo microscopie électronique (cryo-EM) permettent d’explorer, à l’échelle du nanomètre, voire de quelques Å, la conformation et l’organisation des macromolécules en solution, en préservant leur environnement natif, en particulier l’hydratation et l’environnement ionique qui jouent un rôle clef dans leurs structures et leurs propriétés fonctionnelles. A l’origine principalement dédiée à la biologie, la cryo-EM est aussi adaptée à de nombreux objets d’étude de la physique de la matière molle : cristaux liquides lyotropes, poly-électrolytes, matériaux organiques et inorganiques en solution, émulsions, fluides complexes, …
La plateforme du LPS est équipée pour :
- La cryo-EM en films minces dédiée aux les nano-objets en solution : virus, macromolécules et complexes macromoléculaires, liposomes, nanoparticules, …
- La cryo-EM de sections vitreuses (CEMOVIS) pour les spécimens massifs : cellules et tissus biologiques, cristaux liquides, milieux denses, …
Quelques exemples de cryo-EM en film mince au LPS. (A) particules viromimétiques. (B) Cubosome (phytantriol/polymère/eau). (C) Supra-cristaux de nanoparticules d’or. (D, E) Tores d’ADN confinés dans la capside des bactériophages T5 et lambda. (F) Nanotubes d’imogolite. (G) Nano-émulsion stabilisée par des particules colloïdales. (H) Faisceau d’ADN condensé par des protamines.
Cryo microscopie de sections vitreuses (CEMOVIS). De gauche à droite et de haut en bas : corps basal de Paramecium tetraurelia, membranes thylakoides de l’algue Euglena gracilis, inclusion cristalline intracellulaire, phase lamello-colonnaire formée par les nucleosomes en solution, régions des « Mushroom bodies » du cerveau de drosophile.
Équipements
- Cryo microscope électronique JEOL 210F : 200kV, canon FEG, cryo-PP, équipé de « Hole Free Phase Plates » et d’une caméra CCD 4K (Gatan Ultrascan)
- Porte-objets cryo (Gatan 626) et chambre de cryo-transfert
- Robots de vitrification en film mince : Vitrobot Mark IV (Thermofisher) et robot réalisé par le service Electronique et Instrumentation, optimisé pour les spécimens visqueux
- Équipement de vitrification des échantillons massifs à l’hélium liquide (Cryovacublock, Reichert)
- Cryo-ultramicrotome (Leica UC6/FC6) en atmosphère contrôlée (T, HR) équipé d’un micromanipulateur et d’un microscope de fluorescence
- Evaporateur/métaliseur (Leica ACE)
- « Plasma cleaner » (Cressington)
La plateforme est un plug-in-lab de l’université Paris Saclay (CRYOTEM@LPS) et fait partie du réseau national METSA.
Contacts
Amélie Leforestier : amelie.leforestier@universite-paris-saclay.fr
Jéril Degrouard : jeril.degrouard@ universite-paris-saclay.fr
